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流式細(xì)胞儀檢測A172細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告書 

一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 

表格一：實(shí)驗(yàn)儀器 

表格二：試劑 

二、 實(shí)驗(yàn)步驟 

細(xì)胞培養(yǎng) 取對數(shù)生長期的 A172 細(xì)胞，按 1*105個/mL 以 1mL 體積接種于 6 孔板內(nèi)。無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜,到轉(zhuǎn)染時使細(xì)胞達(dá)到 70％的匯合率。 

轉(zhuǎn)染 

將 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中,混合均勻。 

將 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中，混合均

勻。在室溫下孵育 5 分鐘。 

將上述兩種混合物混合（總體積 800uL）,輕輕混合均勻在室溫下孵育

20 分鐘形成復(fù)合物。 

在 6 孔板中每孔加入 800uL 復(fù)合物。十字法混合均勻。 

細(xì)胞在 37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6h 后棄上清液,并加入 10％胎牛血

清的 DMEM 培養(yǎng)液。 

染色 消化并離心收集細(xì)胞（1000rpm/min）后棄上清，加入無鈣、鎂 PBS 1mL 洗

2 次，離心后棄上清。分別加入 100μL binding buffer、5μL Annexin V-FITC 和 5μL

PI 溶液，室溫避光孵育 15min。 

4. 檢測 

加入 400μL binding buffer 后以標(biāo)準(zhǔn)程序用流式細(xì)胞儀檢測，汞激發(fā)波長

488nm，計(jì)數(shù) 1 萬個細(xì)胞。 

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

省略